SC∕T 7206.3-2007 牡蛎单孢子虫病诊断规程 第3部分：原位杂交诊断法(水产)
|
ID： |
75162139DEC74608B82BDEBFB9B5C737 |
|
文件大小(MB)： |
1.43 |
|
页数： |
10 |
|
文件格式： |
|
|
日期： |
2021-12-23 |
|
购买： |
文本摘录（文本识别可能有误，但文件阅览显示及打印正常，pdf文件可进行文字搜索定位）：
ICS 65.020.30,B 41,中华人民共和国水产行业标准,SC/T 7206.3-2007,牡航单抱子虫病诊断规程,第3 部分:原位杂交诊断法,Dia伊ostic ProωcoIs for Haplosporidiosis of Oyster一,Part 3: in situ Hybridization Metbod,2007-06-14 发布2007-09-01 实施,中华人民共和国农业部发布,前E,SC/ T 72师{牡筋单泡子虫病诊断规程》分为三个部分.,一一第1 部分:组织印片的细胞学诊断法;,一一第2 部分:组织病理学诊断法;,一→第3 部分:原位杂交诊断法,本部分为SC/T 7206 的第3 部分,本部分的附录A 为规范性附录,本部分由中华人民共和国农业部提出,本部分由全国水产标准化技术委员会归口,SC/ T 7206 .3- 2007,本部分起草单位.中国水产科学研究院黄海水产研究所、全国水产技术推广总站、深圳出入境检验,检疫局,本部分主要起草人:杨冰、黄健、陈爱平、江育林、王崇明、王秀华、魏琦、刘莉,I,SC/ T 7206 .3-2007,1 范围,牡蜻单袍子虫病诊断规程,第3 部分:原位杂交诊断法,SC/T 7206 的本部分规定了牡贩尼氏单泡子虫病的原位杂交诊断方法的原理、试剂与材料、仪器设,备、操作步骤和结果判定,本部分根据尼氏单袍子虫在组织中的定位与感染程度对牡妨单袍子虫病进行确诊,2 规范性引用文件,下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有,的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究,是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本适用于本标准,SC/ T 7202.3-2∞7 斑节对虾杆状病毒病诊断规程第3 部分 组织病理学诊断法,SC/T 7205.1-2∞7 牡纺包纳米虫病诊断规程第1 部分. 组织印片的细胞学珍断法,SC/ T 7206. 1 -2007 牡甥单泡子虫病诊断规程第1 部分:组织印片的细胞学诊断法,3 原理,3. 1 牡航尼氏单袍子虫及其病理学特征,见SC/T 7206. 1 -2∞7 (牡妨单抱子虫病诊断规程第1 部分组织印片的细胞学诊断法) 中3.1,的规定,3 .2 技术原理,原位杂交检测方法是以非放射性标记物一-地高辛(DIG)标记的WSSV 核酸探针与存在于切片中,的WSSVDNA 进行核酸分子杂交，并通过抗原一抗体反应和酶- 底物的化学显色反应在组织切片上,显示出WSSV 的存在位点。原位杂交可完整地保持组织与细胞的形态，能在复杂的组织中针对单一细,胞进行病毒检测， 准确地反映出组织细胞中病毒的分布,4 试剂和材料,4. 1 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馆水或去离子水或相当纯度的水,4 . 2 寡聚核背酸探针MSX1347: 序列为:5 -ATEKTGT-TGOTGA-CGC-TAA-cα〉3' ，合成时用地高,辛(DIG)标记的脱氧核糖核昔尿略咬残基(D1G-dU)代替脱氧核糖核背胸腺嘀咬残基(dT) ,4.3 碱位磷酸酶偶联的DIG 抗体(AP-抗DIG ， O.75 UIμL ， 4 't:) :生化试剂,4 .4 二甲苯,4 . 5 元水乙醇。I 4 . 6 川乙醇,4 .7 中性树胶:生物染色用,4 8 石蜡(熔点52't: - 54'(;) 切片级,4 .9 戴维森氏AFA(Davidson ' s AFA) 固定液按SCIT 7202. 3-2007 (斑节对虾杆状病毒病诊断规程,第3 部分:组织病理学诊断法)附录A 的规定,l,SC/ T 7206.3-2007,4.10 80% 乙醉按SC/T 7202. 3-2007 (斑节对虾杆状病毒病诊断规程第3 部分:组织病理学诊断,法)附录A 的规定,4. 11 70% 乙醇按SC/T 7202. 3-2007 (斑节对虾杆状病毒病诊断规程第3 部分:组织病理学诊断,法)附录A 的规定,4. 12 50% 乙醇按SC/T 7202.3-2∞7 (斑节对虾杆状病毒病诊断规程第3 部分.组织病理学诊断,法)附录A 的规定,4.13 500 周ImL多聚赖氨酸按附录A 的规定,4. 14 2 X SSC 按附录A 的规定,4. 15 l X ~汇按附录A 的规定,4.16 0.5 x 挺直二按附录A 的规定,4. 17 TNE 按附录A 的规定,4.18 100μg /mL蛋白酶K 按附录A 的规定,4.19 0 .4%甲醒按附录A 的规定,4.20 杂交缓冲液按附录A 的规定,4.21 缓冲液I 按附录A 规定,4.22 缓冲液E 按附录A 规定,4.23 缓冲液阻按附录A 规定,4.24 缓冲液N 按附录A 规定,4.25 显影液按附录A 规定,4.26 0.5%停斯麦棕Y(Bismark brown Y)按附录A 规定,427 阳性对照为受尼氏单袍子虫感染且组织病理学上有明显病灶的牡妨组织切片(未脱蜡) ,4.28 阴性对照为未受尼氏单抱子虫感染且经原位杂交证明为阴性的牡蜘组织切片(未脱蜡) ,5 器材和说备,5. 1 石蜡切片机:满足4 阳-7μm 厚度的石蜡连续切片要求,5 .2 水浴锅室温- 100t: ， 士l t: ,5.3 显微镜:带高倍镜( 40 x ) 和汹镜(1 00 x ) ,5.4 微量移液器:量程。.5μL - I0μL ， 5μL - 40μL、40μL - 200μL、2∞ μL -……
……